雞蛋蛋清中溶菌酶的測(cè)定(紫外分光法)

雞蛋蛋清中溶菌酶的測(cè)定(紫外分光法)

原理

溶菌酶在281 nm誠(chéng)處有最大吸收峰。溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品用每升溶教含9g氯化鈉的溶液溶解并稀釋成不同梯度濃度,在28np波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求出標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。試樣經(jīng)過(guò)處理,按溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定為法測(cè)定試樣中的吸光度,根據(jù)其吸光度值棚標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算試樣中溶菌酶含量。

方法依據(jù)GB/T 25879—2010

儀器及試劑

美析UV-1700紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(波長(zhǎng)范圍190 nm~900 nm,波長(zhǎng)確定性士0.3 nm,波長(zhǎng)重復(fù)精度±0.1 nm)。

電子分析天平(感量0.1 mg.1 mg)。

離心機(jī)(最大離心力2325g,具10 ml離心管)。

溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品,優(yōu)級(jí)純,活力在20 0o0 U/mg左右。

氯化鈉,分析純。

蒸餾水,按GB/T 6682執(zhí)行。

醫(yī)用脫脂紗布。

0.9%氯化鈉溶液:稱取氯化鈉(4.3.2)0.9 g,溶解于蒸餾水中,定容至100 mL。

溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)工作液:稱取溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品0.500 g,以 0.9%氯化鈉溶液溶解定容至1000 mL,得到500 ug/mL 的溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)工作液，于4℃密封保存?zhèn)溆?/span>,1周內(nèi)使用。

分析步驟

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別吸取溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)工作液1mL,2 mL,3 ml,4 mL,5mL于25 mL 容量瓶中,以0.9%氯化鈉溶液稀釋至刻度,混勻。用10mm石英比色皿比色,以0.9%氯化鈉溶液為參比溶液,在波長(zhǎng)281 nm處依次測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)工作液的吸光度﹐以溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并求出標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。

試樣測(cè)定

雞蛋蛋清用4層紗布過(guò)濾,取過(guò)濾試樣l mL,用0.9%氯化鈉溶液稀釋定容至100 mL,混勻,避免起泡沫。吸取5 mL蛋清的氯化鈉溶液,1 310g離心5 min,取上清液,按照繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作步驟,在波長(zhǎng)281 nm 處測(cè)定試樣溶液的吸光度。平行測(cè)定三次,取結(jié)果的算術(shù)平均值,由標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算試樣溶液中溶菌酶的濃度。

結(jié)果的計(jì)算

根據(jù)試樣溶液吸光度值,用標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算試樣溶液中溶菌酶的濃度c。雞蛋蛋清中溶菌酶的含量按式計(jì)算:

式中:

X—雞蛋蛋清中溶菌酶的含量,單位為微克每毫升(ug/mL);

c——試樣溶液中溶菌酶的濃度,單位為微克每毫升(ug/mL);

V——試樣溶液定容的體積,單位為毫升(mL);

V₁——試樣的體積,單位為毫升(mL)。

儀器參數(shù)

關(guān)于我們

上海美析儀器公司簡(jiǎn)介

上海美析儀器有限公司(以下簡(jiǎn)稱美析)，是一家具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的高新技術(shù)企業(yè)，美析的創(chuàng)業(yè)理念“科技——因你改變”，并以此為企業(yè)宗旨，不斷探究、果敢創(chuàng)新。特別是在分析測(cè)試儀器領(lǐng)域，不斷開發(fā)出先進(jìn)的產(chǎn)品，使美析成為優(yōu)質(zhì)儀器資源的供應(yīng)者。

      美析主營(yíng)光譜類儀器可見(jiàn)分光光度計(jì)、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、原子吸收光譜儀、超微量分光光度計(jì)、原子熒光光度計(jì)、ICP電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀、ICP電感耦合等離子體質(zhì)譜儀，目前，我們的產(chǎn)品已廣泛應(yīng)用于有機(jī)化學(xué)、無(wú)機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)藥、環(huán)保、冶金、石油、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。同時(shí)美析利用在產(chǎn)品機(jī)械結(jié)構(gòu)、光學(xué)設(shè)計(jì)、電氣應(yīng)用和軟件開發(fā)方面積累的豐富經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合市場(chǎng)的最新實(shí)際需求，近期將陸續(xù)推出一批全新的分析類儀器。

美析的總部及生產(chǎn)基地設(shè)在上海，營(yíng)銷中心設(shè)在北京，并在江蘇、上海、山東三地建有研發(fā)基地。為充分利用各地的智力資源，美析與國(guó)內(nèi)外的部分科研單位也進(jìn)行了深層次的科研合作，不斷將科研成果轉(zhuǎn)化為生產(chǎn)力。為更好的服務(wù)于廣大客戶，美析儀器國(guó)內(nèi)設(shè)有12家辦事機(jī)構(gòu)，度身定制符合您需求的應(yīng)用解決方案，提高產(chǎn)品的附加值。在不斷服務(wù)國(guó)內(nèi)用戶的同時(shí)，美析也與20多個(gè)國(guó)家的分銷機(jī)構(gòu)建立了深度的戰(zhàn)略合作關(guān)系。

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