蜂蜜中甘油含量的應(yīng)用方案（紫外分光光度法）

蜂蜜中甘油含量的應(yīng)用方案（紫外分光光度法）

方案依據(jù)GB/T 18932.6---2002蜂蜜中甘油含量紫外分光光度測(cè)定方法。甘油的方法檢出限為20 mg/ kg。

關(guān)鍵詞  紫外  甘油 蜂蜜

原理

甘油在甘油激酶催化作用下,與腺苷-5^，-三磷酸鹽反應(yīng)生成L-甘油-3-磷酸鹽和腺苷-5'-二磷酸鹽。而生成的腺苷-5’-二磷酸鹽在丙酮酸鹽激酶的存在下,又與磷酸烯醇丙酮酸鹽反應(yīng),再轉(zhuǎn)化成腺苷-5'-三磷酸鹽和丙酮酸鹽。丙酮酸鹽在L-乳酸鹽脫氫酶的作用下﹐被煙酰胺腺囁呤二核苷酸還原為L-乳酸鹽。通過在340 nm測(cè)定煙酰胺腺嘌呤二核苷酸消耗量,計(jì)算出甘油含量。

儀器試劑和材料

美析UV-1700A紫外分光光度計(jì)。

比色: 1cm光路。微量注射器:100ul

溶液一;2.0 g輔酶和甘氨酸緩沖溶液的混合物, pH=7.4。其中緩沖溶液中含有煙酰胺腺嘌呤二核苷酸,7mg;腺苷-5’-三磷酸鹽，22 mg;磷酸烯醇丙酮酸鹽，1l mg;硫酸鎂;穩(wěn)定劑。貯存在4℃冰箱里。使用前在室溫下放置1 h,加人11 mL.水,使之完全溶解,搖勻。

溶液二:0.4 mL的懸濁液。含有丙酮酸鹽激酶,240U;L-乳酸鹽脫氫酶,220 U。貯存在4℃冰箱里。使用前在室溫下故置1 h。

溶液三:甘油激酶懸濁液,34 U。貯存在4℃冰箱里。使用前在室溫下放置1h.

甘油標(biāo)準(zhǔn)溶液:394 mg/L。貯存在4℃冰箱里。使用前在室溫下放置1h。僅作為測(cè)定質(zhì)量監(jiān)控用,測(cè)定值與給定值允許差為5%。

試樣制備與保存

試樣的制備

對(duì)無結(jié)晶的實(shí)驗(yàn)室樣品,將其攪拌均勻。對(duì)有結(jié)晶的樣品,在密閉情況下,置于不超過60℃的水浴中溫?zé)?/span>,振蕩,待樣品全部融化后攪勻,迅速冷卻至室濕。分出0.5 kg作為試樣。制備好的試樣置于樣品瓶中,密封,并標(biāo)明標(biāo)記。將試樣于常溫下保存。

分析步驟

稱取1g試樣,精確到1mg.盤于100 mL三角瓶中,加水使試樣完全溶解,定容至20 mL.

紫外分光光度法測(cè)定

取三個(gè)比色皿,分別用于空白溶液,試樣測(cè)定液和標(biāo)準(zhǔn)溶液的測(cè)定。

a)對(duì)盛空白溶液﹑試樣測(cè)定液和標(biāo)準(zhǔn)洛液的比色皿中分別加入l mL溶液一

b)對(duì)盛空白溶液的比色皿中加入2 mL水;對(duì)盛試樣測(cè)定液的比色皿中加入2 mL試樣測(cè)定液，對(duì)盛標(biāo)準(zhǔn)溶液的比色皿中加人0.10 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液和1.9 ml水﹔

c)對(duì)盛空白溶液、試樣測(cè)定液和標(biāo)準(zhǔn)溶液的比色皿中分別加人0.010 mL溶液二

d)將比色皿內(nèi)溶液充分混合,待反應(yīng)10 min后,用紫外分光光度計(jì)在 340 nm的波長(zhǎng)處連續(xù)測(cè)定空白溶液、試樣測(cè)定液和標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度各10次,分別計(jì)算各自吸光度的平均值A ﹔

e)對(duì)盛空白溶液﹑試樣測(cè)定液和標(biāo)準(zhǔn)溶液的比色皿中分別加人0.010 mL溶液三;

F)操作步驟同D)分別計(jì)算各自吸光度的平均值A₂;

按上述步驟,對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定。

結(jié)果計(jì)算

根據(jù)上面的測(cè)定,分別求出空白溶液和試樣測(cè)定液兩次測(cè)定吸光度的差值(A一Az),用試樣測(cè)定液吸光度的差值減去空白溶液吸光度的差值,求出?A,即:

蜂蜜中甘油的含量按式(2計(jì)算:

式中:

c———試樣中甘油含量,單位為毫克每千克( mg / kg>:

?A———由式(1）計(jì)算求出﹔

440—-—由甘油相關(guān)的物理常數(shù)計(jì)算得出。

儀器參數(shù)

關(guān)于我們

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上海美析儀器有限公司(以下簡(jiǎn)稱美析)，是一家具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的高新技術(shù)企業(yè)，美析的創(chuàng)業(yè)理念“科技——因你改變”，并以此為企業(yè)宗旨，不斷探究、果敢創(chuàng)新。特別是在分析測(cè)試儀器領(lǐng)域，不斷開發(fā)出先進(jìn)的產(chǎn)品，使美析成為優(yōu)質(zhì)儀器資源的供應(yīng)者。

      美析主營(yíng)光譜類儀器可見分光光度計(jì)、紫外可見分光光度計(jì)、原子吸收光譜儀、超微量分光光度計(jì)、原子熒光光度計(jì)、ICP電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀、ICP電感耦合等離子體質(zhì)譜儀，目前，我們的產(chǎn)品已廣泛應(yīng)用于有機(jī)化學(xué)、無機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)藥、環(huán)保、冶金、石油、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。同時(shí)美析利用在產(chǎn)品機(jī)械結(jié)構(gòu)、光學(xué)設(shè)計(jì)、電氣應(yīng)用和軟件開發(fā)方面積累的豐富經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合市場(chǎng)的最新實(shí)際需求，近期將陸續(xù)推出一批全新的分析類儀器。

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