土壤硝態(tài)氮的測定應(yīng)用方案（紫外分光光度法）

土壤硝態(tài)氮的測定應(yīng)用方案（紫外分光光度法）

方法原理

土壤浸出液中的NO-在紫外分光光度計波長210nm處有較高的吸光度，而浸出液中的其它物質(zhì)，除OH-、CO32-、 HCO3、 NO2-和有機(jī)質(zhì)等外，吸光度均很小。將浸出液加酸中和酸化，即可消除OH-、CO32-、HCO3的干擾。NO2-一般含量極少，也很容易消除。因此，用校正因數(shù)法消除有機(jī)質(zhì)的干擾后，即可用紫外分光光度法直接測定NO3-的含量。

待測液酸化后，分別在210nm和275nm處測定吸光度。A210 是NO;和以有機(jī)質(zhì)為主的雜質(zhì)的吸光度;A275只是有機(jī)質(zhì)的吸光度,因?yàn)?/span>NO3~在275nm處已無吸收。但有機(jī)質(zhì)在275nm處的吸光度比在210nm處的吸光度要小R倍,故將A275校正為有機(jī)質(zhì)在210nm處應(yīng)有的吸光度后，從A210中減去，即得NO3在210nm處的吸光度(O A)。

儀器設(shè)備及試劑

美析UV-1800紫外可見分光光度計;

石英比色皿

往復(fù)式或旋轉(zhuǎn)式振蕩機(jī)，滿足180r/min 土20r/min的振蕩頻率或達(dá)到相同效果;

H₂SO₄溶液(1: 9): 取10mL濃硫酸緩緩加入90mL水中。

氯化鈣浸提劑[c (CaCl2 .6H20) =0.01mol/L^-1]:稱取2.2g 氯化鈣(CaCl₂.6H2O)溶于水中，稀釋至1L;

硝態(tài)氮標(biāo)準(zhǔn)貯備液[ρ(N)= 100μg. mL^-1]:準(zhǔn)確稱取0.7217g經(jīng)105°C~110C烘2h的硝酸鉀(KNO₃， 優(yōu)級純)溶于水，定容至IL，存放于冰箱中;

硝態(tài)氮標(biāo)準(zhǔn)溶液[ρ (N)-10μ g. mL]:測定當(dāng)天吸收10.00mL 硝態(tài)氮標(biāo)準(zhǔn)貯備液于100mL容量瓶中用水定容。

操作步驟

稱取10.00g土壤樣品放入200mL塑料瓶中，加入50mL氯化鈣浸提劑，蓋嚴(yán)瓶蓋，搖勻，在振蕩機(jī)上于20℃ ~25℃振蕩30min (振蕩頻率: 180r/min 土20r/min)，干過濾。

吸取25.00mL待測液于50mL三角瓶中，加1.00mL1: 9H₂SO₄ 溶液酸化，搖勻。用滴管將此液裝入1cm光徑的石英比色槽中，分別在210nm和275nm處測讀吸光值(A210 和A275)，以酸化的浸提劑調(diào)節(jié)儀器零點(diǎn)。以NO₃^-的吸光值(△A)通過校準(zhǔn)曲線求得測定液中硝態(tài)氮含量。

NO₃的吸光值(△A)可由下式求得:

△A=A₂₁₀-A₂₇₅×R

式中R為校正因數(shù)，是土壤浸出液中雜質(zhì)(主要是有機(jī)質(zhì))在210nm和275nm處的吸光度的比值。其確定方法為:

A₂₁₀是波長210nm處浸出液中NO;的吸收值(A_210硝)與雜質(zhì)(主要是有機(jī)質(zhì))的吸收值(A_210雜)的總和，即A₂₁₀=A_210硝十A_210雜，得出A_210雜= A₂₁₀-A_210硝。選取部分土樣用

酚二磺酸法測得NO₃^--N的含量后，根據(jù)土液比和紫外法的工作曲線，即可計算各浸出液

應(yīng)有的A_210硝值，即可得出A_210雜。

A275是浸出液中雜質(zhì)(主要是有機(jī)質(zhì))在275nm處的吸收值( 因?yàn)?/span>NO;在該波長處已無吸收)，它比A_210雜小R倍，即_A210雜=R.A₂₇₅，得出校正因數(shù)R=A_210雜/ A₂₇₅。

各不同區(qū)域可根據(jù)多個土壤測定R值的統(tǒng)計平均值，作為其他土壤測試NO₃^--N的校正因數(shù)，其可靠性依從于被測土壤的多少，測定的土壤越多，可靠性越大。

校準(zhǔn)曲線的繪制:分別吸取10μg .mL'NO3^--N標(biāo)準(zhǔn)溶液0，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00mL,用氯化鈣浸提劑定容至50mL，即為0、0.2，0.4，0.8，1.2，1.6μg. mL^-1的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。各取25.00mL于50mL三角瓶中，分別加lmL 1: 9H2SO4 溶液搖勻，用標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的零濃度調(diào)節(jié)儀器零點(diǎn)測A₂₁₀，計算A₂₁₀對NO₃^--N濃度的回歸方程，或者繪制工作曲線。

結(jié)果計算

土壤硝態(tài)氮(N)

式中: ρ一查校準(zhǔn)曲線或求回歸方程而得測定液中NO3-N的質(zhì)量濃度，μg. mL^-1;

V_浸提劑體積，mL (50mL);

D-一浸出液稀釋倍數(shù)， 若不稀釋則D=1;

10³和1000-分別將ug換算成mg和將g換算為kg;

m一土壤質(zhì)量，g;

注意事項(xiàng)

1)土壤硝態(tài)氮含量- -般用新鮮樣品測定，如需以硝態(tài)氮加銨態(tài)氮反映無機(jī)氮含量，則

可用過2mm篩的風(fēng)干樣品測定，但需標(biāo)明為風(fēng)干基。

2) 一般上壤中NO2含量很低，不會干擾NO;的測定。如果NO2含量高時，可用氨基

磺酸消除(HNO₂+NHSO₃H=N2+H₂SO₄+H₂0)，它在210nm處無吸收，不干擾NO_3.測定。

3)浸出液的鹽濃度較高，操作時最好用滴管吸取注入比色皿中，盡量避免溶液溢出比色皿外，污染比色血的外壁，影響其透光性。

4)大批樣品測定時，可先測完各液(包括浸出液和標(biāo)準(zhǔn)系列溶液)的A₂₁₀值， 再測A₂₇₅值，以避免逐次改變波長所產(chǎn)生的儀器誤差。

5)如需同時測定土壤NH4⁺-N，可選用2 mol. Ll KC1或1 mol. Ll NaCl 溶液制備待測液。但2 mol.L^-1 KCl 溶液本身在210nm處吸光度較高，因此同時測定土壤NH4⁺-N和NO₃-N時，可選用吸光度較小的1 mol.L^-1 NaCl溶液為浸提劑。

6)如果吸光度很高(A>1時)，可從比色槽中吸出- -半待測液，再加一-半水稀釋，重新測讀吸光度，如此稀釋直至吸光度小于0.8。再按稀釋倍數(shù)，用氯化鈣浸提劑將浸出液準(zhǔn)確稀釋測定。

7)根據(jù)北京和河北石灰性15個土壤樣品的測試結(jié)果，校正因素(R)的平均值為3.6,不同土類的R值略有差異，各地可根據(jù)主要土壤情況進(jìn)行校驗(yàn)，求出當(dāng)?shù)赝寥赖?/span>R值。

儀器參數(shù)

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上海美析儀器有限公司(以下簡稱美析)，是一家具有自主知識產(chǎn)權(quán)的高新技術(shù)企業(yè)，美析的創(chuàng)業(yè)理念“科技——因你改變”，并以此為企業(yè)宗旨，不斷探究、果敢創(chuàng)新。特別是在分析測試儀器領(lǐng)域，不斷開發(fā)出先進(jìn)的產(chǎn)品，使美析成為優(yōu)質(zhì)儀器資源的供應(yīng)者。

      美析主營光譜類儀器可見分光光度計、紫外可見分光光度計、原子吸收光譜儀、超微量分光光度計、原子熒光光度計、ICP電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀、ICP電感耦合等離子體質(zhì)譜儀，目前，我們的產(chǎn)品已廣泛應(yīng)用于有機(jī)化學(xué)、無機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)藥、環(huán)保、冶金、石油、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。同時美析利用在產(chǎn)品機(jī)械結(jié)構(gòu)、光學(xué)設(shè)計、電氣應(yīng)用和軟件開發(fā)方面積累的豐富經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合市場的最新實(shí)際需求，近期將陸續(xù)推出一批全新的分析類儀器。

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