紫外可見光度計

分光光度法測定發(fā)酵食品中微量乙醇的含量

發(fā)布日期：2017-08-28  點擊次數(shù)：
關(guān)鍵詞：分光光度法；乙醇；美析儀器www.macylab.com；UV-1300
微量乙醇是低度果酒，含酒精飲料和調(diào)味品等發(fā)酵食品中重要的風味物質(zhì)。目前，對于微量乙醇的測定主要以氣相色譜法為主，重鉻酸鹽氧化分光光度法測定微量乙醇含量，是一種快速準確的測定方法，它具有操作簡便，所需分析儀器簡單的特點，尤其適用于生產(chǎn)和質(zhì)檢部門的日常分析。
 一、測定原理 
在酸性溶液中，乙醇可被重鉻酸氧化生成乙酸，重鉻酸鉀中的六價鉻被還原成三價鉻，其反應(yīng)式為： 3C2H5OH+2K2Cr2O7+8H2SO4=3CH3COOH+2K2SO4+2Cr2(SO4)+11H2O 
反應(yīng)中生成的三價鉻為綠色，它在585nm處有最大吸收峰，且溶液顏色的深淺與乙醇含量成正比，可以在分光光度計上比色，通過與標準系列進行比較進行定量。
 二、儀器與試劑 
1、  UV-1300紫外可見分光光度計（美析儀器）
2、   蒸餾裝置 
3、PHS—3C酸度計
4、乙醇標準溶液：準確吸取2.00mlGR級無水乙醇，置于預先裝有少量蒸餾水的100ml容量瓶中，混勻，加水定容至刻度，搖勻備用。 
5、重鉻酸鉀溶液，稱取10.00gAR級K2Cr2O7，用少量水溶解，并定容至250ml。
 6、濃硫酸：AR級，含量95~98%。
 7、1%溴百里酚藍指示劑 
8、  NaoH溶液：C(NaoH)=1.0mol/L   
 三、測定方法 
1、標準曲線的繪制 
取7支25mlA級比色管，各加入2.00ml重鉻酸鉀溶液和2.50ml濃H2SO4，混勻，并冷卻，依次加入0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00和1.25ml乙醇標準溶液，混勻，反應(yīng)10分鐘后加水至刻度，再次混勻，以0號管調(diào)零，于585nm波長處分別測定其吸光度，繪制標準曲線。 表1      標準曲線的繪制    （L=10mm） 
乙醇含量ul/25ml    0.00          4.00          8.00       12.00         16.00       20.00        25.00 
吸光度                  0.000        0.075         0.146         0.221         0.292         0.366          0.454         回歸方程為：y=55.23x-0.1367      相關(guān)系數(shù)  r=0.99997
 2、樣品的制備 
準確移取100.00ml樣品于250ml蒸餾燒瓶中,加入25mH2O,再加數(shù)滴溴百里酚藍指示劑，用NaoH溶液滴定至藍色（深色樣品用酸度計指示中和至中性），加幾粒沸石，連接好蒸餾裝置進行蒸餾，餾出液用100ml容量瓶收集，接收瓶用冰浴進行冷卻，緩慢蒸餾至接近刻度時取下，放入20℃水浴中30分鐘，用H2O定容至刻度，搖勻，備用。
 3、樣品的測定 
取1.00ml制備好的樣品，按標準曲線繪制的方法進行測定，利用回歸方程計算出樣品中乙醇的含量。
 四、結(jié)果與討論
 1、波長的選擇 
吸取1.25ml乙醇標準溶液按上述測定方法進行操作，并在400~800nm波長范圍內(nèi)對樣液進行掃描，掃描結(jié)果表明，該體系在585nm波長隨近有最大吸收峰，并且試劑空白值在該波長處很低，故選擇λ=585nm作為測定波長。
 2、濃H2SO4用量對吸光度的影響 
濃度H2SO4用量（ml） 0.60         0.80        1.00         1.50         2.00        2.50        3.00 
吸光度                  0.226        0.236        0.244        0.263        0.280        0.292         0.294 
按反應(yīng)式計算，確保2.00ml重鉻酸鉀溶液全部參加反應(yīng)，約需0.6ml98%的濃H2SO4，實際工作中，為確保反應(yīng)迅速、徹底，濃H2SO4用量常常過量。在固定重鉻酸鉀溶液用量和反應(yīng)時間的前提下，在一定范圍內(nèi)混合體系的吸光度隨濃H2SO4用量的增加而增加，當濃H2SO4用量超過2.50ml時，吸光度趨于穩(wěn)定，故選擇濃H2SO4用量為2.50ml。 
3、顯色時間與穩(wěn)定時間 
時間（分鐘）          10            40           60               120             360 
吸光度①            0.074           0.074          0.073            0.073           0.073 
②            0.145            0.144        0.144           0.143           0.143         按照試驗方法測定同一樣液在不同時間的吸光度值，結(jié)果表明，混合體系的吸光度在顯色10分鐘后至至少6小時以內(nèi)基本保持穩(wěn)定。 4、方法精密度 
測定次數(shù)           1          2         3         4          5          6        X        Cv 
測定結(jié)果（%）   1.45      1.42     1.44       1.45      1.47     1.45     1.45     1.12         對麥精啤露樣品重復6次測定，變異系數(shù)為1.12% 5、靈敏度與線性范圍 
該分析方法的檢出限為0.05%，乙醇含量在0~25ul/25ml范圍內(nèi)呈顯著的線性關(guān)系。  
6、樣品測定及回收率     （n=3） 
樣 品           樣品測定值（%）         加入量（%）         測定值（%）         回收率（%）
 麥精啤露            1.45                       0.75                    2.18                 97.3
 糯米飲料            1.42                       0.50                    1.92                    100.0 
醬     油             0.67                       0.50                    1.15                    96.0 
山葡萄酒            3.86                       0.75                    4.60                    98.7                                                                                           
用本方法對監(jiān)督檢驗抽取的含酒精飲料、醬油、低度山葡萄酒等多組樣品進行測定，加標回收率在96.0~100%之間，測定結(jié)果令人滿意 
 
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