分光光度法組胺的測(cè)定

關(guān)鍵詞：分光光度法；組胺；美析儀器www.macylab.com；V-1200;V-1100

一、組胺的簡(jiǎn)介 

組織胺(Histamine)是一種活性胺化合物，化學(xué)式是C5H9N3,分子量是111。是廣泛存在于動(dòng)植物體內(nèi)的一種生物胺，是由組氨酸脫羧而形成的，通常貯存于組織的肥大細(xì)胞中。在體內(nèi)，組胺是一種重要的化學(xué)遞質(zhì)，當(dāng)機(jī)體受到某種刺激引發(fā)抗原-抗體反應(yīng)時(shí)，引起肥大細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性改變，釋放出組胺，與組胺受體作用產(chǎn)生病理生理效應(yīng)。 

     組胺合成過程主要發(fā)生在肥大細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞、肺部、皮膚和胃腸粘膜中，和儲(chǔ)存組胺的組織相一致。 

在肥大細(xì)胞中，組胺作為無活性的復(fù)合物儲(chǔ)存在顆粒中，這一復(fù)合物是由組胺和多聚硫化陰離子、肝磷脂和一種陰離子蛋白所組成。如果不被儲(chǔ)存，將迅速被胺氧化酶滅活。 

二、組胺的功能 

組胺存在于肥大細(xì)胞內(nèi)，亦存在于肺、肝及胃的粘膜組織內(nèi)。它在過敏與發(fā)炎的調(diào)節(jié)上扮演一個(gè)很重要角色。組織胺屬于一種化學(xué)訊息，亦是胺能神經(jīng)傳遞素,參與中樞與周邊的多重生理功能。在中樞系統(tǒng)，組胺是由特定的神經(jīng)所合成例如位在下丘腦后部的結(jié)節(jié)-乳頭核,神經(jīng)細(xì)胞多向延伸至大腦其他區(qū)域與脊椎，因此暗示組織胺可能參與睡眠，荷爾蒙的分泌，體溫調(diào)節(jié)，食欲與記憶形成等功能，另外還位于網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)與端腦；在周邊部分，組胺主要儲(chǔ)存在肥大細(xì)胞,嗜堿粒細(xì)胞和腸嗜鉻細(xì)胞,可引起癢、打噴嚏、流鼻水等現(xiàn)象，此外組胺結(jié)合到血管平滑肌上的接受器(H1R)導(dǎo)致血管擴(kuò)張因而產(chǎn)生局部水腫，組胺會(huì)使肺的氣管平滑肌收縮引起呼吸道狹窄進(jìn)而呼吸困難，腸道平滑肌收縮降低血壓以及增加心跳(tachycardia)等多項(xiàng)生理反應(yīng)。 

三、組胺的性狀 

組胺為廣泛存在于人體組織的自身活性物質(zhì)。組織中的組胺主要含于肥大細(xì)胞及嗜堿細(xì)胞中。因此，含有較多肥大細(xì)胞的皮膚、支氣管粘膜和腸粘膜中組胺濃度較高，腦脊液中也有較高濃度。肥大細(xì)胞顆粒中的組胺常與蛋白質(zhì)結(jié)合，物理或化學(xué)等刺激能使肥大細(xì)胞脫顆粒，導(dǎo)致組胺釋放。組胺與靶細(xì)胞上特異受體結(jié)合，產(chǎn)生生物效應(yīng)；如小動(dòng)脈、小靜脈和毛細(xì)血管舒張，引起血壓下降甚至休克；增加心率和心肌收縮力，抑制房室傳導(dǎo)；興奮平滑肌，引起支氣管痙攣，胃腸絞痛；刺激胃壁細(xì)胞，引起胃酸分泌。組胺受體有H1、H2、H3亞型。組胺的臨床應(yīng)用已逐漸減少，但其受體阻斷藥在臨床上卻有重大價(jià)值。 

四、組胺的測(cè)定 

（一）、分光光度法 

一、原理 

   樣品中的組胺用三氯醋酸提取，再;對(duì)氨基苯磺酸鈉和亞硝酸鈉反應(yīng)生成紅色化合物其吸光R與樣品中組胺含量成正比。樣品與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。

 二、儀器與試劑 

儀器：721型分光光度計(jì)、電熱恒溫水浴箱 試劑： 

1、1OOg/L三氯醋酸：稱取100g三氯醋酸(分析純)，用水溶解并定容至1000ml； 

2、250g/L氫氧化鈉：稱取12.5g氫氧化鈉(分析純)，用水溶解并定容至50ml；

 3、5g/L對(duì)氨基苯磺酸鈉：稱取O.5g對(duì)氨基苯碘酸鈉(分析純)，用0.1mol/L氫氧化鈉溶解并定容至100m1。 

4、5Og/L鹽酸亞硝酸鈉：稱取5g亞硝酸鈉(分析純)用水溶解并定容至100ml，臨用時(shí)與1mol/L的鹽酸等量混合。 

5、組胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱取在硫酸干燥器中干燥24h的鹽酸組胺16.6mg(分析純)，用水溶解并定容至100m1容量瓶中。該溶液每毫升含組胺100ug。 

6、組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液:準(zhǔn)確吸取組胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液l0ml于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，該溶液每毫升含組胺為10ug。

 三、樣品處理 

        除去樣品中的非可食部分，將樣品搗碎、混勻，準(zhǔn)確稱取1-5g于50ml具塞三角瓶中(或50ml比色管)中，加人20m1三氯醋酸(100g/L),在600C水浴中浸提30min，過濾。殘?jiān)盟?次(每次加水l0ml)并過濾，合并濾液，用氫氧化鈉溶液(250g/L)中和濾液至pH5.0，再用水定容至100m1。

 四、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作與樣品測(cè)定

 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 

準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)使用液0, 0.5, 1.0. 2.0, 3.0, 4.0m1于lOml比色管中，各加水至5.OmI(相當(dāng)于0. 5.0, 10.0,20.0, 30.0, 40.0 u g組胺)，各管分別加入5.0ml對(duì)氨基苯碘酸鈉溶液和0.3m1鹽酸亞硝酸鈉溶液，混勻5min后以零管為參比，于450nm，1cm比色杯測(cè)定吸光度值，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線、

 五、樣品側(cè)定 

      準(zhǔn)確吸取1.0-5.0ml樣品處理液于l0ml比色管中，以下按第四項(xiàng)中“加水至5.0ml~”進(jìn)行；樣品與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。   

六、結(jié)果計(jì)算 

式中:  X一樣品中組胺含量，mg/1000g；A一測(cè)定時(shí)樣液中組胺的質(zhì)量，ug        W一樣品質(zhì)量，g；V一測(cè)定時(shí)取濾液的量，ml；V，一樣品濾液總量，ml 

 

 

關(guān)鍵詞：分光光度法；組胺；美析儀器www.macylab.com；V-1200;V-1100