分光光度法測(cè)定牛奶中的羅紅霉素殘留
發(fā)布日期：2017-08-28 點(diǎn)擊次數(shù)：
關(guān)鍵詞：分光光度法；牛奶；羅紅霉素；美析儀器www.macylab.com；UV-1300
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
掌握紫外分光光度法檢測(cè)牛奶樣品中羅紅霉素殘留量的原理與方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
羅紅霉素是紅霉素的一種衍生產(chǎn)品，它在冰醋酸中被濃HCl降解后，可與對(duì)二甲氨基苯甲醛形成在486nm波長(zhǎng)處有最大吸收的有色物質(zhì)，與標(biāo)準(zhǔn)品比較，通過(guò)比色可以實(shí)現(xiàn)定量分析。
三、儀器與試材
1．儀器與器材
UV-1300型紫外分光光度計(jì)、離心機(jī)、超聲波清洗器等。
2．試劑
除特別注明外，實(shí)驗(yàn)中所用試劑均為分析純，水為去離子水或蒸餾水。
(1)常規(guī)試劑與溶液：冰醋酸、HCl、95％乙醇、對(duì)二甲氨基苯甲醛、HCl一冰醋酸混合液(2-+-1，體積比)。
(2)顯色劑(O．5％)：適量對(duì)二甲氨基苯甲醛，以冰醋酸配制。
(3)羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液(0．8mg／mL)：稱(chēng)取羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99％)適量，以95％
乙醇配制。
3．實(shí)驗(yàn)材料
2～3種新鮮牛奶，各50mL。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1．樣品提取
稱(chēng)取1.00g樣品于100mL具塞錐形瓶中，加入95％乙醇10mL，振搖使之分散均勻，超聲提
取20min，以4000r／min離心10min，上清液為樣品提取液。
2．測(cè)定
(1)取羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0．5mL、1.0mL、1．5mL、2．0mL、2．5mL，分別置于50mL容量瓶中，加冰醋酸20mL、顯色劑5．0mL，再加HCl一冰醋酸混合液至刻度，搖勻，對(duì)應(yīng)的羅紅霉素的濃度分別為0、8μg／mL、16μg／mL、24μg／mL、32μg／mL、40μg／mL。
(2)于25～35℃放置15min后，于486nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定A486nm以濃度為橫坐標(biāo)，A486nm為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(3)取樣品提取液2mL，按(1)、(2)所述方法，測(cè)定樣品提取液的A486nm根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，查得提取液中羅紅霉素的濃度。同時(shí)做試劑空白。
3．計(jì)算
按下式計(jì)算樣品中羅紅霉素的含量：
x=cV/m
式中，x為佯品中羅紅霉素的含量，mg／kg；c為樣品提取液中羅紅霉素的濃度，μg／mL；m為樣品的質(zhì)量，g；V為樣品提取液的體積，mL。
五、注意事項(xiàng)
在測(cè)定過(guò)程中，應(yīng)根據(jù)樣品中羅紅霉素的含量，確定樣品提取液的使用量。
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