石墨爐原子吸收光譜法測(cè)定人全血中鉛含量

 關(guān)鍵詞:石墨爐原子吸收光譜法;血液;鉛;硝酸;美析集團(tuán) www.macylab.com;AA1800

  血鉛是鉛接觸首選檢測(cè)指標(biāo)，主要反映近期鉛接觸量和軟組織中的鉛含量，是目前臨床上兒童及成人鉛中毒的診斷指標(biāo)。我國(guó)在2018年頒布《血中鉛的測(cè)定》(GBZ/T316.1—2018)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法，并于2019年1月1日實(shí)施。此方法中血液樣品的前處理需要使用硝酸，而硝酸作為易制爆化學(xué)品，按照《劇毒、易制爆化學(xué)品、放射源存放場(chǎng)所治安防范要求》規(guī)定，在購(gòu)買、存放、使用等方面均有嚴(yán)格的管理制度，為臨床工作增加很多困難，且極大地提高了檢測(cè)成本。為此，本研究旨在不使用硝酸的前提下，建立一種準(zhǔn)確可靠、易推廣的血鉛含量檢測(cè)方法。

一、材料與方法

1.1儀器與試劑

石墨爐原子吸收光譜儀（美析集團(tuán) www.macylab.com），

旋渦振蕩器，

超純水系統(tǒng)，

肝素鋰真空采血管，

超純水，

硝酸鈀1000mg/L，

血鉛質(zhì)控樣品(挪威Seronorm，TraceElementWholeBloodL-1/L-2，1406263/1406264)，

鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml，國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心，173026-1)。

1.2方法

1.2.1樣品處理

將樣品放至室溫并充分混勻后，取0.1ml血樣、0.9ml0.1%曲拉通溶液于1.5ml具蓋塑料離心管中，旋渦振蕩器混勻后，以體積比10%硝酸鈀溶液作為基體改進(jìn)劑，上機(jī)測(cè)定。

1.2.2鉛標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制取鉛標(biāo)準(zhǔn)液(1000μg/ml)1ml，在100ml容量瓶中以純水定容至刻度，配制成10μg/ml的鉛標(biāo)準(zhǔn)中間液;再取鉛標(biāo)準(zhǔn)中間液1ml，μg/L;

二、結(jié)果

2.1線性范圍鉛濃度在0.06～80μg/L線性良好，線性方程為Y=0.00203X－0.00338，Ｒ²=0.9995(X為鉛濃度，Y為吸光度值)。方法檢出限0.06μg/L，在100ml容量瓶中以0.1%曲拉通溶液定容至刻度，配制成100μg/L的鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液;分別取鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液0、0.1、0.2、0.4、0.8ml，以0.1%曲拉通溶液定容至0.9ml，再分別加入0.1ml低本底人血(含鉛量小于定量下限)，配制成0、10、20、40、80 g/L鉛標(biāo)準(zhǔn)系列。

1.2.3測(cè)定條件

波長(zhǎng)283.3nm，燈電流10mA，狹縫0.7nm，石墨爐具體條件設(shè)置見表1。

1.2.4計(jì)算

C=10c0

C—樣品中鉛的濃度，μg/L;

c0—由回歸方程計(jì)算所得樣品溶液中鉛的濃度，

定量下限0.21μg/L(以20μl進(jìn)樣量計(jì))。

2.2精密度實(shí)驗(yàn)

2.2.1批內(nèi)精密度

取高鉛含量血樣(約400μg/L)和低鉛含量血樣(約10μg/L)各1支，按上述方法處理后上機(jī)測(cè)定，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定7次，經(jīng)計(jì)算批內(nèi)精密度為0.9%、2.5%。

2.2.2批間精密度

取高鉛含量血樣(約400μg/L)和低鉛含量血樣(約10μg/L)各1支，按上述方法重復(fù)6次預(yù)處理和測(cè)定，經(jīng)計(jì)算批間精密度為1.1%、2.9%。

2.3準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

2.3.1加標(biāo)回收率

選擇血鉛濃度為203.2μg/L的血樣，加入本底濃度約0.5倍和1倍濃度的鉛。加標(biāo)回收率結(jié)果見表2。

2.3.2質(zhì)量控制

樣品測(cè)定全血質(zhì)控樣品L1(質(zhì)控范圍7.9～11.9μg/L)和全血質(zhì)控樣品L2(質(zhì)控范圍269～405μg/L)各1支，按1.2.1進(jìn)行處理后上機(jī)測(cè)定，測(cè)定結(jié)果L1為10.2μg/L、L2為335.9μg/L。

2.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

將鉛接觸者的新鮮血液樣品分成4組，每組6份，儲(chǔ)存于4℃冰箱中，分別在第1天、第3天、1周、2周后各分析一組，后三組測(cè)定均值與第1天測(cè)定均值相比較，計(jì)算相對(duì)偏差，結(jié)果分別為2.3%、3.9%、16.2%，表明血液樣品在4℃冰箱中可以放置保存7d。

2.5抗干擾實(shí)驗(yàn)

分別向同一份血液樣品中加入高于中毒診斷值或正常參考值數(shù)倍的較為常見的重金屬或非金屬毒物，本實(shí)驗(yàn)選擇汞、砷、銅、鎘4種元素，每種元素設(shè)6個(gè)平行樣品，測(cè)定結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析表明其對(duì)鉛含量的測(cè)定并無顯著影響。見表3。

2.6方法比對(duì)

實(shí)驗(yàn)隨機(jī)取100份人血液樣品，采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法、本實(shí)驗(yàn)方法分別進(jìn)行檢測(cè)，血鉛幾何均值結(jié)果分別為217.8、225.1μg/L，兩種方法測(cè)定結(jié)果的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.626，P=0.382)。

三、討論

3.1石墨爐條件設(shè)置

3.1.1預(yù)灰化石墨爐原子吸收法測(cè)定全血中鉛含量經(jīng)常使用硝酸脫蛋白，其作用是將血液中的絕大部分有機(jī)物沉淀分離，能較好地去除基體干擾;缺點(diǎn)是酸度會(huì)影響石墨管的使用壽命。不加硝酸直接稀釋則易導(dǎo)致石墨管積碳嚴(yán)重，基體干擾較大，而影響測(cè)定結(jié)果。本研究在石墨爐條件設(shè)置中，在灰化階段前加入一步“預(yù)灰化”程序(見表1步驟3)，即通入空氣增加氧化環(huán)節(jié)，以起到除碳作用。

3.1.2灰化溫度選擇

按上述儀器條件及樣品處理方法，在其它條件固定的情況下，灰化溫度在700～1100℃范圍內(nèi)，測(cè)定含鉛量約400μg/L的血液樣品。結(jié)果表明，1000℃時(shí)吸光度響應(yīng)值最大，略高于900℃，但900℃時(shí)背景吸收較低且峰型更好，綜合考慮選擇900℃。見圖1。

3.1.3原子化溫度的選擇

按上述儀器條件及樣品處理方法，在其它條件固定的情況下，原子化溫度在1400～1800℃范圍內(nèi)，測(cè)定含鉛量約400μg/L的血液樣品。結(jié)果表明，1600℃時(shí)吸光度響應(yīng)值最大。

背景吸收低且峰型好，故選擇1600℃，見圖2。

3.2樣品稀釋液的選擇

TritonX-100作為一種表面活性劑可以溶解脂質(zhì)，破壞細(xì)胞膜，有利于細(xì)胞充分破裂溶解出鉛，并使樣品呈穩(wěn)定的均相狀態(tài)，易于灰化，使背景信號(hào)值降低，有利于檢測(cè)［4］。

3.3基體改進(jìn)劑的選擇

在石墨爐原子吸收分析中，常用基體改進(jìn)劑有磷酸二氫銨、硝酸鈀、硝酸鎂等。金屬鈀是中國(guó)科學(xué)家在國(guó)際上首先提出的一種通用基體改進(jìn)劑。在鉛元素檢測(cè)的灰化階段與之形成非常牢固的共價(jià)鍵使其能夠承受更高的灰化溫度。本研究按上述儀器條件及樣品處理方法，分別以磷酸二氫銨、硝酸鈀、硝酸鎂做基體改進(jìn)劑，結(jié)果顯示，在相同條件下以硝酸鈀做基體改進(jìn)劑時(shí)峰型好且響應(yīng)值高，背景干擾小。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法不使用硝酸，僅用0.1%曲拉通溶液稀釋血液10倍，以10%硝酸鈀溶液做基體改進(jìn)劑，樣品處理步驟簡(jiǎn)單快速，方法檢出限和定量下限低、準(zhǔn)確度較高，精密度好，適用于人全血鉛含量的測(cè)定

四、文獻(xiàn)出處及鳴謝
本文主要內(nèi)容部分出自：1.石墨爐原子吸收光譜法測(cè)定人全血中鉛含量；王凱，龐妍，張瑤瑤                          

                              中圖分類號(hào):Ｒ135.11文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B文章編號(hào):1002－221X(2020)05－0461－03；DOI:10.13631/j.cnki.zggyyx.2020.05.024