分光光度法顯色反應(yīng)的介紹

　　分光光度法進行比色分析或光度分析時，首先要把待測組分轉(zhuǎn)變成有色化合物，然后進行比色或光度測定。將待測組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)叫顯色反應(yīng)，與待測組分形成有色化合物的試劑稱為顯色劑。
　　一、顯色反應(yīng)的選擇
　　顯色反應(yīng)分兩類，即絡(luò)合反應(yīng)和氧化還原反應(yīng)，綜合反應(yīng)是zui主要的顯色反應(yīng)。
　　選用的原則是：
　　1）選擇靈敏的顯色反應(yīng)。摩爾吸光系數(shù)ε的大小是顯色反應(yīng)靈敏度高低的重要標志，因此應(yīng)當選擇生成的有色物質(zhì)的ε較大的顯色反應(yīng)。一般來說，當ε為104-105時，可認為該反應(yīng)靈敏度較高。
　　2）盡可能選擇選擇性好的顯色劑。即顯色劑僅與一個組分或少數(shù)幾個組分發(fā)生顯色反應(yīng)。
　　3）顯色劑在測定波長處無明顯吸收。通常把兩種有色物質(zhì)zui大吸收波長之差稱為對比度，一般要求顯色劑與有色化合物的對比度在60nm以上。
　　4）反應(yīng)生成的有色化合物組成恒定，化學性質(zhì)穩(wěn)定。
　　二、顯色條件的選擇
　　吸光光度法測定的是顯色反應(yīng)達到平衡后溶液的吸光度，因此要得到準確的結(jié)果，必須從研究平衡著手，了解影響顯色反應(yīng)的因素，控制適當?shù)臈l件，使顯色反應(yīng)完全和穩(wěn)定。
　　1）根據(jù)溶液平衡原理，有色絡(luò)合物的穩(wěn)定常數(shù)越大，顯色劑過量越多，越有利于待測組分形成有色絡(luò)合物。但是過量顯色劑的加入有時會引起副反應(yīng)，對測定反而不利。
　　2）酸度對顯色反應(yīng)的影響是多方面的。一種金屬離子與某種顯色劑反應(yīng)的適宜酸度范圍是通過實驗來確定的。確定的方法是固定待測組分及顯色劑的濃度，改變?nèi)芤簆H值，測定其吸光度，作出吸光度-pH值關(guān)系曲線，選擇曲線平坦部分對應(yīng)的pH值作為測定條件。
　　3）顯色反應(yīng)一般在室溫下進行，有的反應(yīng)需要加熱，以加速顯色反應(yīng)，使之進行完全。
　　4）大多數(shù)顯色反應(yīng)需要經(jīng)過一定的時間才能完成，其長短與溫度的高低有關(guān)，也會受到空氣的氧化或發(fā)生光化學反應(yīng)使眼色顏色減弱。因此必須通過實驗作出在一定溫度下的吸光度-時間關(guān)系曲線，得到適宜的顯色時間。