紫外-可見分光光度法測(cè)定番茄紅素與酒葡萄原汁中維生素B6
發(fā)布日期：2020-02-13 點(diǎn)擊次數(shù)：
美析儀器www.macylab.com
紫外-可見分光光度法測(cè)定維生素 B6的原理是：采用以0.035mol/L CH3COOH 為介質(zhì)，測(cè)定維生素B6溶液體系簡單，操作方便、快速，線性范圍寬。
測(cè)定和樣品處理：取系列標(biāo)準(zhǔn)維生素 B6 溶液于10mL 比色管中，加入0.10mol/L CH3COOH 溶液3.5mL，用水稀釋至刻度，搖勻。在紫外-可見分光光度計(jì)上，用1cm 比色皿，以試劑空白為參比，于295nm 處測(cè)定吸光度，求得工作曲線。取系列標(biāo)準(zhǔn)維生素 B6 片劑或針劑，配制成0.2mg/mL 溶液與標(biāo)準(zhǔn)系列一樣進(jìn)行測(cè)定，由工作曲線法即可求得維生素 B6 的含量。
二、番茄紅素的測(cè)定
番茄紅素是一種具有多種生理功能的類胡蘿卜素，通常狀況下與其他類胡蘿卜素同時(shí)存在于多種生物體中。在實(shí)際研究中，番茄紅素的準(zhǔn)確測(cè)定始終是困擾研究人員的一個(gè)難題。
目前的測(cè)定方法主要有：
（1）以蘇丹紅代替番茄紅素作為標(biāo)準(zhǔn)品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用以測(cè)定番茄紅素的含量；
（2）以石油醚或正己烷為溶劑，在472nm 比色測(cè)定其吸光度，用摩爾消光系數(shù)（ =3450）來計(jì)算其中番茄紅素的含量；
（3）用高壓液相色譜法，通過與標(biāo)準(zhǔn)樣品的峰面積比來測(cè)定樣品中番茄紅素的含量。
現(xiàn)有這幾種測(cè)定番茄紅素的方法普遍存在著一定的缺陷：
①不需要標(biāo)準(zhǔn)品，但其系統(tǒng)誤差較大，同時(shí)又不能排除β-胡蘿卜素等其他類胡蘿卜素的干擾。
②要求有番茄紅素的標(biāo)準(zhǔn)樣品，而高純度的番茄紅素本身穩(wěn)定性很差，不宜長期存放，且價(jià)格非常昂貴，日常測(cè)定難度很大。另外，高效液相色譜（HPLC）測(cè)定又要受到儀器設(shè)備及標(biāo)準(zhǔn)樣品的限制。
紫外-可見分光光度法測(cè)定番茄紅素有兩種方法：一種方法是采用蘇丹紅Ⅰ代替番茄紅素作為對(duì)照品，以485nm 波長下測(cè)得的吸光度為縱坐標(biāo)，蘇丹紅Ⅰ對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時(shí)測(cè)定待測(cè)樣品溶液在485nm波長下的吸光度值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中番茄紅素的含量。國標(biāo) GB/T 14215—2008就是利用該法來測(cè)定番茄醬中番茄紅素的含量。鄭麗麗等（2006）利用該方法測(cè)定番茄紅素片中番茄紅素的含量，結(jié)果顯示該方法簡便快捷、穩(wěn)定準(zhǔn)確，適合番茄紅素片劑的含量測(cè)定。另外一種方法是在472nm 下測(cè)定待測(cè)樣品溶液的吸光度，利用番茄紅素的最大摩爾吸光系數(shù)的經(jīng)驗(yàn)數(shù)值（E=18.5×104）計(jì)算番茄紅素的含量。
一、酒葡萄原汁中維生素 B6 的測(cè)定
維生素 B6（vitamin B6）又稱吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在體內(nèi)以磷酸酯的形式存在，是一種水溶性維生素，遇光或堿易破壞，不耐高溫。1936年定名為維生素 B6。維生素 B6為無色晶體，易溶于水及乙醇，在酸液中穩(wěn)定，在堿液中易破壞，吡哆醇耐熱，吡哆醛和吡哆胺不耐高溫。維生素 B6在酵母菌、肝臟、谷粒、肉、魚、蛋、豆類及花生中含量較多。維生素B6為人體內(nèi)某些輔酶的組成成分，參與多種代謝反應(yīng)，尤其是和氨基酸代謝有密切關(guān)系。紫外-可見分光光度法測(cè)定維生素 B6的原理是：采用以0.035mol/L CH3COOH 為介質(zhì)，測(cè)定維生素B6溶液體系簡單，操作方便、快速，線性范圍寬。
測(cè)定和樣品處理：取系列標(biāo)準(zhǔn)維生素 B6 溶液于10mL 比色管中，加入0.10mol/L CH3COOH 溶液3.5mL，用水稀釋至刻度，搖勻。在紫外-可見分光光度計(jì)上，用1cm 比色皿，以試劑空白為參比，于295nm 處測(cè)定吸光度，求得工作曲線。取系列標(biāo)準(zhǔn)維生素 B6 片劑或針劑，配制成0.2mg/mL 溶液與標(biāo)準(zhǔn)系列一樣進(jìn)行測(cè)定，由工作曲線法即可求得維生素 B6 的含量。
二、番茄紅素的測(cè)定
番茄紅素是一種具有多種生理功能的類胡蘿卜素，通常狀況下與其他類胡蘿卜素同時(shí)存在于多種生物體中。在實(shí)際研究中，番茄紅素的準(zhǔn)確測(cè)定始終是困擾研究人員的一個(gè)難題。
目前的測(cè)定方法主要有：
（1）以蘇丹紅代替番茄紅素作為標(biāo)準(zhǔn)品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用以測(cè)定番茄紅素的含量；
（2）以石油醚或正己烷為溶劑，在472nm 比色測(cè)定其吸光度，用摩爾消光系數(shù)（ =3450）來計(jì)算其中番茄紅素的含量；
（3）用高壓液相色譜法，通過與標(biāo)準(zhǔn)樣品的峰面積比來測(cè)定樣品中番茄紅素的含量。
現(xiàn)有這幾種測(cè)定番茄紅素的方法普遍存在著一定的缺陷：
①不需要標(biāo)準(zhǔn)品，但其系統(tǒng)誤差較大，同時(shí)又不能排除β-胡蘿卜素等其他類胡蘿卜素的干擾。
②要求有番茄紅素的標(biāo)準(zhǔn)樣品，而高純度的番茄紅素本身穩(wěn)定性很差，不宜長期存放，且價(jià)格非常昂貴，日常測(cè)定難度很大。另外，高效液相色譜（HPLC）測(cè)定又要受到儀器設(shè)備及標(biāo)準(zhǔn)樣品的限制。
紫外-可見分光光度法測(cè)定番茄紅素有兩種方法：一種方法是采用蘇丹紅Ⅰ代替番茄紅素作為對(duì)照品，以485nm 波長下測(cè)得的吸光度為縱坐標(biāo)，蘇丹紅Ⅰ對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時(shí)測(cè)定待測(cè)樣品溶液在485nm波長下的吸光度值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中番茄紅素的含量。國標(biāo) GB/T 14215—2008就是利用該法來測(cè)定番茄醬中番茄紅素的含量。鄭麗麗等（2006）利用該方法測(cè)定番茄紅素片中番茄紅素的含量，結(jié)果顯示該方法簡便快捷、穩(wěn)定準(zhǔn)確，適合番茄紅素片劑的含量測(cè)定。另外一種方法是在472nm 下測(cè)定待測(cè)樣品溶液的吸光度，利用番茄紅素的最大摩爾吸光系數(shù)的經(jīng)驗(yàn)數(shù)值（E=18.5×104）計(jì)算番茄紅素的含量。
