銀鹽法測(cè)定砷含量標(biāo)準(zhǔn)曲線

關(guān)鍵詞：食品分析；坤；美析儀器www.macylab.com；UV-1300型

一、銀鹽法

 1.原理 

樣品經(jīng)消化后，以碘化鉀、氯化亞錫將高價(jià)砷還原為三價(jià)砷，然后與鋅粒和酸產(chǎn)生的新生態(tài)氫生成砷化氫，經(jīng)銀鹽溶液吸收后，形成紅色膠態(tài)物，在510nm處比色，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。最低檢出量為0.2mg/kg。

 2.適用范圍 

標(biāo)準(zhǔn)方法（GB/T5009.11-1996），適用于各類(lèi)食品中總砷的測(cè)定。

 3.試劑 

除另有規(guī)定，所用的試劑為分析純?cè)噭?，水為蒸餾水或同等純度水。 （1） 硝酸。 （2） 硫酸。 （3） 鹽酸。 （4） 硝酸＋高氯酸混合液(4＋1)：量取80ml硝酸，加20ml高氯酸，混勻。 （5） 硝酸鎂溶液(150g/L)：稱(chēng)取15g硝酸鎂〖Mg(NO3)2·6H2O〗溶于水中，并稀釋至100ml。 （6） 氧化鎂。 （7） 碘化鉀溶液(150g/L)：稱(chēng)取15g碘化鉀溶于水中，并稀釋至100ml，儲(chǔ)于棕色瓶中。 （8） 酸性氯化亞錫溶液：稱(chēng)取40.0g氯化亞錫（SnCl2·2H2O），加鹽酸溶解并稀釋至100.0ml，加入數(shù)顆金屬錫粒。 氯化亞錫（SnCl2）又稱(chēng)二氯化錫，白色或半透明晶體，帶二個(gè)分子結(jié)晶水（SnCl2·2H2O）的是無(wú)色針狀或片狀晶體，溶于水、乙醇和乙醚。氯化亞錫試劑不穩(wěn)定，在空氣中被氧化成不溶性氯氧化物，失去還原作用，為了保持試劑具有穩(wěn)定的還原性，在配制時(shí)，加鹽酸溶解為酸性氯化亞錫溶液，并加入數(shù)粒金屬錫粒，使其持續(xù)反應(yīng)生成氯化亞錫及新生態(tài)氫，使溶液具有還原性。 氯化亞錫在本實(shí)驗(yàn)的作用為將As5+還原為As3+；在鋅粒表面沉積錫層以抑制產(chǎn)生氫氣作用過(guò)猛。 （9）鹽酸溶液(1＋1)：量取50ml鹽酸，小心倒入50ml水中，混勻。 （10）乙酸鉛溶液(100g/L)。 

（11）乙酸鉛棉花：用100g/L乙酸鉛溶液浸透脫脂棉后，壓除多余溶液，并使疏松，在100℃以下干燥后，儲(chǔ)存于玻璃瓶中。 乙酸鉛棉花塞入導(dǎo)氣管中，是為吸收可能產(chǎn)生的硫化氫，使其生成硫化鉛而滯留在棉花上，以免吸收液吸收產(chǎn)生干擾，硫化物和銀離子生成灰黑色的硫化銀，但乙酸鉛棉花要塞得不松不緊為宜。 （12）無(wú)砷鋅粒。 不同形狀和規(guī)格的無(wú)砷鋅粒，因其表面積不同，與酸反應(yīng)的速度就不同，這樣生成的氫氣氣體流速不同，將直接影響吸收效率和測(cè)定結(jié)果。一般認(rèn)為蜂窩狀鋅粒3g，或大顆粒鋅粒5g均可獲得良好結(jié)果。也有人認(rèn)為大小顆粒的鋅粒混合使用則效果滿(mǎn)意。一般確定標(biāo)準(zhǔn)曲線與試樣均用同一規(guī)格的鋅粒為宜。 （13）氫氧化鈉溶液(200g/L)。 （14）硫酸溶液(6＋94)：量取6.0ml硫酸，小心倒入94ml水中，混勻。 （15）二乙氨基二硫代甲酸銀-三乙醇胺-三氯甲烷溶液：稱(chēng)取0.25g二乙氨基二硫代甲酸銀〖(C2H5)2NCS2Ag〗置于乳缽中，加少量三氯甲烷研磨，移入100ml量筒中，加入1.8ml三乙醇胺，再用三氯甲烷分次洗滌乳缽，洗液一并移入量筒中，再用三氯甲烷稀釋至100.0ml，放置過(guò)夜。濾入棕色瓶中保存。 二乙氨基二硫代甲酸銀，或稱(chēng)二乙基二硫代氨基甲酸銀鹽（diethyl dithio carbamic acid，Ag salt），(C2H5)2NC(S)SAg，分子量256.15，為黃色粉末，不溶于水而溶于三氯甲烷，性質(zhì)極不穩(wěn)定，遇光或熱，易生成銀的氧化物而呈灰色，因而配置濃度不易控制。若市售品不適用，實(shí)驗(yàn)室也可自行制備。 

二乙氨基二硫代甲酸銀制備法：分別溶解1.7g硝酸銀、2.3g二乙氨基二硫代甲酸鈉（DDCNa，銅試劑）于100ml蒸餾水中，冷卻到20℃以下，緩緩攪拌混合，過(guò)濾生成的檸檬黃色銀鹽（AgDDC）沉淀，用冷蒸餾水洗滌沉淀數(shù)次，在干燥器中干燥，避光保存?zhèn)溆谩?nbsp;

吸收液中AgDDC濃度以0.2%～0.25%為宜，濃度過(guò)低將影響測(cè)定的靈敏度及重現(xiàn)性，因此，配置試劑時(shí)，應(yīng)放置過(guò)夜或在水浴上微熱助溶。輕微的混濁可以過(guò)濾除去。若試劑溶解度不好時(shí)，應(yīng)重新配制，吸收液必須澄清。 （16）砷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：精密稱(chēng)取0.1320g在硫酸干燥器中干燥過(guò)的或在100℃干燥2h的三氧化二砷，加5ml 200g/L氫氧化鈉溶液，溶解后加25ml硫酸(6＋94)溶液，移入1000ml容量瓶中，加新煮沸冷卻的水稀釋至刻度，儲(chǔ)存于棕色玻璃塞瓶中。此溶液每毫升相當(dāng)于0.10mg砷。 （17）砷標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取1.0ml砷標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于100ml容量瓶中，加1ml硫酸(6＋94)溶液，加水稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于1.0μg砷。 

4.儀器 

（1）美析UV-1300型分光光度計(jì)。 （2） 測(cè)砷裝置 ① 100～150ml錐形瓶：19號(hào)標(biāo)準(zhǔn)口。 ② 導(dǎo)氣管：管口19號(hào)標(biāo)準(zhǔn)口或經(jīng)堿處理后洗凈的橡皮塞與錐形瓶密合時(shí)不應(yīng)漏氣。管的另一端管徑1.0mm。 ③ 吸收管：10ml刻度離心管作吸收管用。 5.操作方法   

5.1樣品消化 

 （1）硝酸-高氯酸-硫酸法 

 A. 糧食、粉絲、粉條、豆干制品、糕點(diǎn)、茶葉等及其他含水分少的固體食品：稱(chēng)取5.00g或10.00g的粉碎樣品，置于250～500ml定氮瓶中，先加水少許使?jié)駶?rùn)，加數(shù)粒玻璃珠，10～15ml硝酸-高氯酸混合液，放置片刻，小火緩緩加熱，待作用緩和，放冷。沿瓶壁加入5ml或10ml硫酸，再加熱，至瓶中液體開(kāi)始變成棕色時(shí)，不斷沿瓶壁滴加硝酸-高氯酸混合液至有機(jī)質(zhì)完全分解。加大火力，至產(chǎn)生白煙，溶液應(yīng)澄明無(wú)色或微帶黃色，放冷。在操作過(guò)程中應(yīng)注意防止爆炸。  加20ml水煮沸，除去殘余的硝酸至產(chǎn)生白煙為止，如此處理兩次，放冷。將冷后的溶液移入50ml或100ml容量瓶中，用水洗滌定氮瓶，洗滌液并入容量瓶中，放冷，加水至刻度，混勻。定容后的溶液每10ml相當(dāng)于1g樣品，相當(dāng)加入硫酸量1ml。 

 樣品消化液中殘余的硝酸需如法驅(qū)盡，硝酸的存在影響反應(yīng)與顯色，會(huì)導(dǎo)致結(jié)果偏低，必要時(shí)需增加測(cè)定用硫酸的加入量。 

 取與消化樣品 相同量的硝酸-高氯酸混合液和硫酸，按同一方法做試劑空白實(shí)驗(yàn)。 

 B. 蔬菜、水果：稱(chēng)取25.00g或50.00g洗凈打成勻漿的樣品，置于250～500ml定氮瓶中，加數(shù)粒玻璃珠，10～15ml硝酸-高氯酸混合液，以下按糧食等樣品自"放置片刻"起依法操作，但定容后的溶液每10ml相當(dāng)于5g樣品，相當(dāng)加入硫酸量1ml。 

 C. 醬、醬油、醋、冷飲、豆腐、腐乳、醬腌菜等：稱(chēng)取10.00g或20.00g樣品（或吸取10.00ml或20.00ml液體樣品），置于250～500ml定氮瓶中，加數(shù)粒玻璃珠，5～15ml硝酸-高氯酸混合液，以下按糧食等樣品自"放置片刻"起依法操作，但定容后的溶液每10ml相當(dāng)于2g樣品或2ml樣品。 

 D. 含酒精性飲料或含二氧化碳飲料：吸取10.00ml或20.00ml樣品，置于250～500ml定氮瓶中，加數(shù)粒玻璃珠，先用小火加熱除去乙醇或二氧化碳，再加5～10ml硝酸-高氯酸混合液，混勻后，以下按糧食等樣品自"放置片刻"起依法操作，但定容后的溶液每10ml相當(dāng)于2ml樣品。 

 吸取5～10ml水代替樣品，加與消化液相同量的硝酸-高氯酸混合液和硫酸。按相同操作方法做試劑空白實(shí)驗(yàn)。 

 E. 含糖量高的食品：稱(chēng)取5.00g或10.00g的粉碎樣品，置于250～500ml定氮瓶中，先加水少許使?jié)駶?rùn)，加數(shù)粒玻璃珠，10～15ml硝酸-高氯酸混合后，搖勻。緩緩加入5ml或者10ml硫酸，待作用緩和停止起泡沫后，再加大火力，至有機(jī)質(zhì)分解完全，發(fā)生白煙，溶液應(yīng)澄明無(wú)色或微帶黃色，放冷。以下按糧食等樣品自"加20ml水煮沸"起依法操作。 

 F. 水產(chǎn)品：取可食部分樣品搗成勻漿，稱(chēng)取5.00g或10.00g（海產(chǎn)藻類(lèi)、貝類(lèi)可適當(dāng)減少取樣量），置于250～500ml定氮瓶中，加數(shù)粒玻璃珠，10～15ml硝酸-高氯酸混合后，以下按糧食等樣品自"沿瓶壁加入5ml或10ml硫酸" 起依法操作。 

 （2）硝酸-硫酸法：以硝酸代替硝酸-高氯酸混合液進(jìn)行操作。  （3）灰化法 

 A. 糧食、茶葉及其他含水分少的食品：稱(chēng)取5.00g磨碎樣品，置于坩堝中，加入1g氧化鎂，1ml氯化鎳及10ml硝酸鎂溶液，混勻，浸泡4h。于低溫或置水浴鍋上蒸干。用小火炭化至無(wú)煙后移入馬弗爐中加熱至550℃，灼燒3～4h，冷卻后取出。 

 加5ml水濕潤(rùn)灰分后，用細(xì)玻棒攪拌，再用少量水洗下玻棒上附著的灰分至坩堝內(nèi)。放置水浴上蒸干后移入高溫爐550℃灰化2h，冷卻后取出。 

 加5ml水濕潤(rùn)灰分，再慢慢加入10ml鹽酸溶液(1＋1)，然后將溶液移入50ml容量瓶中。坩堝用鹽酸溶液(1＋1)洗滌3次，每次5ml，再用水洗滌3次，每次5ml，洗滌液均并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻。定容后的溶液每10ml相當(dāng)于1g樣品，相當(dāng)于加入鹽酸量（中和需要量除外）1.5ml。全量供銀鹽法測(cè)定時(shí)，不必再加鹽酸。 

 取于灰化樣品相同量的氧化鎂和硝酸鎂溶液，按同一操作方法作試劑空白試驗(yàn)。  B. 植物油：稱(chēng)取5.00g樣品，置于50ml瓷坩堝中，加10g硝酸鎂，再在上面覆蓋2g氧化鎂，將坩堝置小火上加熱，至剛冒煙，立即將坩堝取下，以防內(nèi)容物溢出，待煙小后，再加熱至炭化完全。將坩堝移至馬弗爐中，550℃以下灼燒至灰化完全，冷卻取出。 

 加5ml水濕潤(rùn)灰分，再緩緩加入15ml鹽酸溶液(1＋1)，然后將溶液移入50ml容量瓶中。坩堝用鹽酸溶液(1＋1)洗滌5次，每次5ml，洗滌液均并入容量瓶中，加鹽酸(1＋1)至刻度，混勻。定容后的溶液每10ml相當(dāng)于1g樣品，相當(dāng)于加入鹽酸量（中和需要量除外）1.5ml。 

 取于消化樣品相同量的氧化鎂和硝酸鎂，按同一操作方法作試劑空白試驗(yàn)。  C. 水產(chǎn)品：取可食部分樣品搗成勻漿，稱(chēng)取5.00g置于坩堝中，加1g氧化鎂及10ml硝酸鎂溶液，混勻，浸泡4h。以下按灰化法中糧食等樣品自"于低溫或置水浴鍋上蒸干"起依法操作。  

5.2測(cè)定 

（1）用硝酸-高氯酸-硫酸或硝酸-硫酸消化液 

吸取一定量的消化后的定容溶液（相當(dāng)于5g樣品）及同量的試劑空白液，分別置于150ml錐形瓶中，補(bǔ)加硫酸至總量為5ml，加水至50～55ml。 

吸取0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ml砷標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于0，2，4，6，8，10μg砷）分別置于150ml錐形瓶中，加水至40ml，再加10ml硫酸(1＋1)。 

于樣品消化液，試劑空白液及砷標(biāo)準(zhǔn)溶液中各加3ml 150g/L碘化鉀溶液，0.5ml酸性氯化亞錫溶液，混勻，靜置15min。各加入3g無(wú)砷鋅粒，立即分別塞上裝有乙酸鉛棉花的導(dǎo)氣管，并使管尖端插入盛有4ml銀鹽溶液的離心管中的液面下，在常溫下反應(yīng)45min后，取下離心管，加三氯甲烷補(bǔ)足4ml。用1cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)520nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較。 

砷化氫發(fā)生及吸收應(yīng)防止在陽(yáng)光直射下進(jìn)行，同時(shí)應(yīng)控制溫度在25℃左右，溫度過(guò)高反應(yīng)快，吸收不徹底，過(guò)低則反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)，作用時(shí)間以1h為宜，夏季可縮短為45min。室溫高時(shí)三氯甲烷部分揮散，在比色前用三氯甲烷補(bǔ)足4ml，并不影響結(jié)果。 

吸收液中含有水分時(shí)，當(dāng)吸收與比色環(huán)境的溫度改變，會(huì)引起輕微渾濁，比色時(shí)可微溫使其澄清。

 （2）用灰化法消化液 

取灰化法消化液及試劑空白液，分別置于150ml錐形瓶中。吸取0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ml砷標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于0，2，4，6，8，10μg砷）分別置于150ml錐形瓶中，加水至43.5ml，再加6.5ml鹽酸。以下按①自"于樣品消化液"起依法操作。 6.計(jì)算 

          （A1－A2）× 1000 X = --------------------------------------            M × V2/V1 × 1000 

式中：X-樣品中砷的含量，mg/kg或mg/L； A1-測(cè)定用樣品消化液中砷的含量，μg； A2-試劑空白液中砷的含量，μg； M -樣品質(zhì)量（體積），g（ml）； V1-樣品消化液的總體積，ml； V2-測(cè)定用樣品消化液的體積，ml。

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